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| 目的:探讨 miR-769-5p 在上皮性卵巢癌(EOC)血清外泌体中的表达情况,及其在 EOC 细
胞增殖、迁移和侵袭的影响的机制。 方法:采用反转录-荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证
miR-769-5p 在恶性组、良性组和健康组血清外泌体样本中的表达水平。 采用 Lipofectamine 3000 转
染构建过表达和敲减细胞株,分组为:miR-769-5p mimics 组、mimics-NC 组、miR-769-5p inhibitor 组和
inhibitor-NC 组,通过 CCK-8 实验、划痕愈合实验和 Transwell 小室实验验证 miR-769-5p 对 EOC 细胞
增殖、迁移和侵袭的影响。 对过表达 miR-769-5p 的 EOC 细胞进行转录组测序,并结合公共数据库
的预测结果,确定 miR-769-5p 的潜在靶基因。 双荧光素酶报告基因实验验证 miR-769-5p 和靶基因
的关系。 RT-qPCR 和蛋白质印迹法进一步验证 miR-769-5p 对靶基因的调控作用。 结果:恶性组血
清外泌体中 miR-769-5p 的表达水平较健康组和良性组更低( P < 0. 05)。 与 mimics-NC 组比较,
miR-769-5p mimics 组的 SKOV3 和 OVCAR3 两种 EOC 细胞 OD450 值、迁移率、侵袭个数更低(P <
0. 05)。 与 inhibitor-NC 组比较,miR-769-5p inhibitor 组的两种 EOC 细胞在 OD450值、迁移率、侵袭个
数更高( P < 0. 05)。 双荧光素酶报告基因实验结果显示,共转染 miR-769-5p mimics 与 pEZXFR02-TFAM-WT 后,与 mimics-NC 组,TFAM-WT 型组转染后荧光值显著下降( P < 0. 01),共转染
miR-769-5p mimics 与 pEZX-FR02-report-TFAM-MUT 后,与 mimics-NC 组比较,TFAM-MUT 型组转染
后荧光值差异无统计学意义(P > 0. 05)。 实验表明,miR-769-5p 能够结合 TFAM 的 3'-UTR 区域。 与
mimics-NC 组比较,miR-769-5p mimics 组 EOC 细胞 TFAM mRNA 和 TFAM 蛋白表达量更低(P <
0. 05)。 结论:miR-769-5p 在 EOC 血清外泌体中显著低表达,具有成为肿瘤早期诊断生物标志物的
潜力。 同时,miR-769-5p 可能通过靶向 TFAM 抑制 EOC 细胞的增殖、迁移和侵袭。 |
| 关键词: 外泌体 miR-769-5p 线粒体转录因子 A 上皮性卵巢癌 |
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