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| 目的:探讨使用CRISPR-Cas9系统敲除YTH结构域m6A RNA结合蛋白2(YTHDF2)后对子宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响。方法:培养子宫颈癌HeLa细胞，使用CRISPR-Cas9系统构建YTHDF2敲除细胞系；分为对照组、敲除1组和敲除2组，行克隆形成实验、CCK8实验、裸鼠移植瘤模型分析YTHDF2在体内、体外增殖中的作用，RNA测序探讨作用机制。结果:双sgRNA片段敲除策略成功敲除YTHDF2,敲除1组、敲除2组增殖曲线明显低于对照组，表现为时间依赖性，与对照组相比，敲除1组、敲除2组的HeLa细胞增殖能力显著下降，细胞克隆形成数明显降低，皮下移植瘤质量明显减小，差异均有统计学意义(P<0.001);RNA水平负调控细胞周期G2/M期转换的基因集上调，细胞黏附分子基因集下调，Ras和Wnt信号通路下调，差异均有统计学意义(FDR<0.05)。结论:敲除YTHDF2通过上调负调控细胞周期G2/M期转换的基因，抑制子宫颈癌细胞增殖、克隆形成及皮下成瘤能力。 |
| 关键词: 子宫颈癌 YTH结构域m6A RNA结合蛋白2 CRISPR-Cas9系统 |
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| 基金项目:四川省科技项目(编号：2021YJ0124)； |
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