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| 目的:探讨Smad3在未足月胎膜早破(PPROM)胎膜中的表达情况,Smad3对羊膜上皮细胞的生物学行为的影响,及其在未足月胎膜早破发病机制中的作用。方法:收集12例PPROM孕妇(PPROM组)和15例正常足月孕妇(对照组)的胎膜组织,利用蛋白质印迹法比较胎膜组织中的Smad3和磷酸化Smad3(p-Smad3)蛋白表达水平;免疫组织化学方法检测p-Smad3在胎膜组织中的表达及定位;免疫荧光法检测p-Smad3在人羊膜上皮细胞系(WISH)中的表达及定位WISH细胞分为3组:空白对照组(不经任何处理)、阴性对照组及SIS3抑制剂组;Smad3磷酸化特异性抑制剂SIS3处理WISH细胞后,利用Edu方法和流式细胞技术分别检测其对细胞增殖和凋亡的影响;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白表达的变化。结果:①p-Smad3/Smad3在PPROM组的蛋白相对表达量(1.248±0.140)明显低于对照组(1.579±0.199),差异有统计学意义(P<0.05)。②胎膜组织中p-Smad3主要表达于羊膜上皮细胞和绒毛膜滋养细胞,且在WISH细胞中p-Smad3主要表达于细胞核;③SIS3抑制剂组WISH细胞的增殖能力[(39.094±5.142)%]明显低于对照组[(58.249±6.444)%],差异有统计学意义(P<0.05);④SIS3抑制剂组细胞凋亡水平[(9.623±1.645)%]相较于对照组[(5.080±0.276)%]显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);⑤与阴性对照组比较,p-Smad3水平的降低分别导致cleaved caspase-3蛋白(0.629±0.038 vs 1.084±0.057)和BAX蛋白(0.856±0.052 vs 1.387±0.079)上调,以及BCL-2蛋白下调(0.997±0.048 vs 0.736±0.069),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:p-Smad3蛋白水平的降低可能通过抑制羊膜上皮细胞的增殖、促进其凋亡而参与未足月胎膜早破的发生,其机制可能与上调BAX、下调BCL-2的表达相关。 |
| 关键词: Smad3 未足月胎膜早破 羊膜上皮细胞 增殖 凋亡 |
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| 基金项目:国家重点研发计划资助(编号:2016YFC1000407)； 重庆市科委重点研发项目(编号:cstc2017shms-zdyfX0034)； |
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